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电泳加工厂出现新的技术--双向电泳加工


蛋白质研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个i蛋白,并表明蛋白质谱不是稳定的,而是随环境而变化. 双向电泳原理简明,第一向进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点; 较早期相比,2-DE有两个主要的进步:首先,极高的重复性使有机体的参考图谱,可通过Internet获得,来比较不同组织类型、不同状态的基因表达;其次,高加样量使得2-DE成为一项真正的制备型技术. 

跑第一向时,为什么要设定一个电流的最大值电压(50 μ A/ 胶)?电流的平方和功率成正比。电流增大,功率增大,放出的热量也随之增大,就会导致胶条的温度增加。当温度超过 30 摄氏度时,液里的尿素就容易解离,产生一些极性分子,从而对等电聚焦产生影响。跑第一向时,为什么刚开始的电压比较低,而后逐渐增高? 

   第二向 SDS-PAGE电泳 

1. 配制 12%的丙烯酰胺凝胶。

2. 配制胶条平衡缓冲液 I

3. 待凝胶凝固后, 倒去分离胶表面的MilliQ水、 乙醇或水饱和正丁醇,用MilliQ 水冲洗。

4. 在桌上先放置干的厚滤纸,聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另 一份厚滤纸用 MilliQ水浸湿,挤去多余水分,然后直接置于胶条上,轻轻吸 干胶条上的矿物油及多余样品,这样可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。

5. 将胶条转移至样品水化盘中,加入 6ml(17cmIPG)平衡缓冲液 I ,在水平摇床 上缓慢摇晃 15 分钟。

6. 配制胶条平衡缓冲液 II 。


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